3) 新しい安定同位体標識蛋白質の調製法の開発

NMR法では、¹Hに加え、¹³Cや¹⁵Nを観測対象とするため、安定同位体標識された試料を調製することが必要となる。また、局所的な情報を得るためには 特定のアミノ酸残基や特定の官能基のみを観測するために、高度な安定同位体標識を行う必要がある。 我々は、さまざまなアミノ酸要求性の大腸菌株を作成し、安定同位体標識試料を安価かつ効率よく調製する手法の開発を進めている。また、化学合成法を駆使した部位特異的な安定同位体標識試料の調製にも注力し、¹⁹F標識蛋白質や環状ペプチドの調製法の開発も進めている。

　　　　　　

Development of cost effective protocols to prepare isotope labeled proteins

We recently developed a practical protocol for preparing proteins bearing stereo-selectively C-13-methyl labeled leucines and valines, instead of the commonly used C-13-methyl labeled precursors for these amino acids, by E. coli cellular expression. Using this protocol, proteins with any combinations of isotope-labeled or unlabeled Leu and Val residues were prepared, including some that could not be prepared by the precursor methods. Furthermore, we are developing cost effective protocols to prepare isotope labeled proteins by using mutant E.coli strains and chemical synthesis.

関連論文：
Miyanoiri et al., J. Biomol NMR (2016) [https://doi.org/10.1007/s10858-016-0042-0]
Miyanoiri et al., J. Biomol NMR (2013) [https://doi.org/10.1007/s10858-013-9784-0]
Kawakami … Miyanoiri et al., J. Pep. Sci. (2022) [https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/psc.3406]